čeština

Praktické znalosti základních metod používaných při analýze DNA. Příprava posteru z vlastních experimentálních výsledků.

Je nutné souběžně si zapsat předmět Bioanalytické metody.

Metody vyučování závisejí na způsobu výuky a jsou popsány článkem 7 Studijního a zkušebního řádu VUT.

V průběhu praktika budou vypracovány 4 protokoly formou posteru. Praktikum je ukončeno zápočtem a testem.

1.Uspořádání PCR laboratoře. Bezpečnost práce. Pipetování malých objemů. 2. Příprava probiotické kultury buněk Lactobacillus gasseri pro izolaci bakteriální DNA. Ověření čistoty bakteriální kultury. 3. Lyze buněk a příprava hrubého lyzátu. 4. Deproteinace DNA pomocí fenolu. Srážení DNA ethanolem. 5. Ověření intaktnosti DNA pomocí gelové elektroforézy na agaróze. Vizualizace DNA a dokumentace gelu.
6. Spektrofotometrické stanovení koncentrace a čistoty DNA. Ředění DNA.7. Příprava PCR směsí pro amplifikaci specifického úseku DNA Lactobacillus s použitím purifikované DNA matrice. Stanovení citlivosti PCR. Negativní kontroly. 8.Provedení PCR reakce. Detekce PCR produktů pomocí gelové elektroforézy na agaróze. 9.Výpočet délky amplikonů pomocí externích standardů a programu Bionumerics.
10.Izolace celkové DNA z mléčného výrobku (probiotického nápoje) metodou magnetické separace pomocí magnetických částic P (HEMA-co-GMA). 11. Identifikace a kvantifikace DNA Lactobacillus v mléčném výrobku (probiotický nápoj) pomocí RT-PCR.
12. Testování produkce antimikrobiálních látek. Amplifikace genu kódujícího bakteriocin probiotického kmene L. gasseri.
13. Test.

Cílem praktika je praktické zvládnutí základních technik práce s DNA a amplifikace DNA polymerázovou řetězovou reakcí (PCR). Dalším cílem je příprava posteru.

Účast v praktiku je povinná.

Španová A., Rittich B.: Analýza vybraných druhů baktérií mléčného kvašení pomocí metod molekulární biologie (CS)