čeština

Praktické znalosti základních metod používaných při analýze DNA

Je nutné souběžně si zapsat předmět Bioanalytické metody.

Výuka předmětu je realizována formou: Laboratorní cvičení - 2 vyučovací hodiny týdně. Vyučujícím a studentům je k dispozici e-learningový systém LMS Moodle.

Praktikum je ukončeno zápočtem - identifikace BMK pomocí PCR

1. Uspořádání PCR laboratoře. Bezpečnost práce. Pipetování malých objemů.
2. Kultivace buněk Lactobacillus casei pro izolaci bakteriální DNA. Ověření čistoty bakteriální kultury.
3. Lyze buněk a příprava hrubého lyzátu.
4. Deproteinace DNA pomocí fenolu. Srážení DNA ethanolem.
5. Ověření intaktnosti DNA pomocí gelové elektroforézy na agaróze. Vizualizace DNA a dokumentace gelu.
6. Spektrofotometrické stanovení koncentrace a čistoty DNA.
7. Příprava PCR směsi pro amplifikaci specifického úseku DNA Lactobacillus s použitím purifikované DNA matrice. Negativní kontrola.
8. Provedení PCR reakce.
9. Detekce PCR produktů pomocí gelové elektroforézy na agaróze.
10. Výpočet délky amplifikonu pomocí standardů a programu Bionumerics.
11. Izolace celkové DNA z hrubých lyzátů buněk mléčného výrobku (probiotického nápoje) metodou magnetické separace s využitím magnetických částic P (HEMA-co-GMA).
12. Amplifikace DNA Lactobacillus v mléčném výrobku (probiotický nápoj) pomocí PCR v reálném čase.
13. Test a kontrola protokolů.

Cílem praktika je praktické zvládnutí základních technik práce s DNA, zejména její amplifikace v PCR. Dalším cílem je zvládnutí přípravy posteru.

Účast v praktiku je povinná.

Španová A., Rittich B.: Analýza vybraných druhů baktérií mléčného kvašení pomocí metod molekulární biologie (CS)